产品名称：氧化型谷胱甘肽(GSSG)含量检测试剂盒

产品英文名:Oxidized Glutathione（GSSG）Assay Kit

产品规格：100T/96S   

保存与运输：4℃保存或-20℃保存

产品内容：

试剂一：液体1瓶，50ml，4℃保存。
试剂二：液体1支，170μl，4℃保存。
试剂三：液体1瓶 60ml，4℃保存。
试剂四：液体1瓶 8ml，4℃保存。
试剂五：粉剂1支，4℃保存，用前8ml蒸馏水溶解。溶解后-20℃分装保存。
试剂六：液体1支，40μl，用前0.8ml蒸馏水稀释。
标准品：粉剂1支，10mg，4℃避光保存。
产品说明：
氧化型谷胱甘肽（GSSG）是谷胱甘肽（GSH）的氧化形式，又称为二硫代谷胱甘肽，是两分子的谷胱甘肽氧化而成。GSSG会被谷胱甘肽还原酶还原成GSH，因此机体中大多数是以还原型形式存在。测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。本试剂盒利用谷胱甘肽能和5，5’-二硫代-双-（2-硝基ben甲酸）（5，5’-dithiobis-2-nitrobenoic acid，DTNB）反应产生2-硝基-5-巯基ben甲酸，2-硝基-5-巯基ben甲酸在波长412nm处具有大光吸收的特点，通过2-乙烯吡dian抑制样品中原有的还原型谷胱甘肽，然后利用谷胱甘肽还原酶将GSSG还原为GSH，借此测定氧化型谷胱甘肽的含量。

实验操作：

1. 分光光度计预热30min以上，调节波长412nm，蒸馏水调零。

2. 试剂二放置37℃（哺乳动物）或25℃（一般物种）水浴中保温30min。

3. 标准品的稀释：将标准品用1ml蒸馏水溶解(4℃保存)，浓度为10mg/ml。取适当溶液配制浓度为25μg/ml、20μg/ml、12.5μg/ml、6.25μg/ml、3.125μg/ml、0μg/ml的标准品（试剂一十倍稀释后进行稀释）。

4. 取1.5ml离心管，加入100μL稀释好的标准品或样品，加入2μL试剂二，混匀后37℃孵育30分钟。

5. 制作标准曲线

孵育完成后标准管依次加入700μL试剂三，100 μL试剂四，100 μL试剂五，10 μL试剂六，迅速混匀后，测定412nm处30 s和150 s光吸收A1和A2。吸光度（A2-A1）为横坐标（x），浓度为纵坐标（y）做标准曲线。

6. 样品管依次加入700μL试剂三，100 μL试剂四，100 μL试剂五，10 μL试剂六，迅速混匀后，测定412nm处30 s和150 s光吸收A1和A2，△A= A2- A1。

   注意事项：

7. 样品处理需匀浆*，若当天不能完成测量，可放-80℃保存。

8. 若不确定样品中GSSG含量的高低，可稀释几个梯度后再进行测量。

9. 此方法利用酶促反应速率计算底物浓度，尽量准确在30秒和150秒处完成读数。

10. 因为试剂一中含有蛋白质沉淀剂，因此上清液不能用于蛋白浓度测定。